Quatre façons de tester l'efficacité des produits biologiques dans le traitement des semences

Quatre méthodes de test pour les produits biologiques

1. Méthode de la zone d'inhibition (test de Kirby-Bauer)

Il s'agit d'un moyen rapide et facile de tester l'effet des différents composants de la bouillie de traitement des semences sur les micro-organismes. Elle est largement utilisée dans les laboratoires en raison de sa simplicité et constitue un test précieux lorsque l'on souhaite déterminer rapidement quels composants de la bouillie peuvent être utilisés avec des produits biologiques. L'inconvénient est qu'elle ne permet pas de confirmer si le composant tue ou simplement arrête la croissance du micro-organisme et qu'elle ne montre que des résultats visuels.


Fig. 1 : exemple de résultat de la méthode Kirby-Bauer évaluant les effets de différents composants sur Bacillus sp. dans un milieu Muller-Hinton-Agar (MHA). A est l'échantillon témoin (eau stérilisée uniquement), B montre un effet négatif léger et C montre un effet négatif important.

2. Méthode des unités formant colonie (CFU)

Cette méthode bien connue estime le nombre de cellules vivantes (bactéries ou champignons) dans un échantillon afin de déterminer la concentration de micro-organismes et leur capacité à produire des colonies (ou à coloniser) dans des conditions environnementales spécifiques. Elle est facile à utiliser, donne des résultats en quelques heures et est largement utilisée pour vérifier la durée de conservation des produits biologiques lors de leur enregistrement. Cependant, comme les colonies peuvent provenir d'une ou plusieurs cellules groupées, les résultats ne sont que des estimations. Les cellules viables qui s'agglomèrent peuvent être comptées à tort comme une seule colonie, ce qui peut conduire à des données inexactes sur le nombre de cellules viables (c'est l'une des raisons pour lesquelles les résultats sont exprimés en CFU/mL (ou grammes) plutôt qu'en cellules/mL (ou grammes)).

Fig. 2 : Sur cette image, nous voyons la compatibilité et l'incompatibilité de différentes bouillies de colonies de Trichoderma asperellum après trois jours d'incubation dans un milieu gélosé à base de pomme de terre et de dextrose à 25 °C.

3. Méthode de germination des conidies (méthode de viabilité directe)

Cette méthode est spécifiquement destinée aux spores fongiques (conidies). Par rapport aux méthodes Kirby-Bauer et CFU, ce test fournit des informations plus précises sur le nombre de conidies viables dans un échantillon. Il permet également de déterminer si les conidies sont germées ou non viables, et si elles sont activées mais non germées (conidies viables mais non germées, par exemple en raison d'une courte période d'incubation). Des informations précises peuvent être recueillies sur la manière dont les composants affectent la survie des champignons, seuls ou dans une formulation ou une bouillie de traitement de semence. Les résultats sont disponibles en quelques heures et permettent d'évaluer les effets à long terme des différents composants. Dans certains cas, cette méthode permet de déterminer si le composant va tuer ou arrêter la croissance des conidies au fil du temps.

L'un des inconvénients de cette méthode est le temps nécessaire, principalement au moment des lectures. L’évaluation requiert l’usage d'un microscope optique équipé d'une caméra haute définition intégrée. Elle nécessite également un contrôle précis de l'environnement pendant la période d'incubation, car tout écart de température à ce stade peut influencer considérablement les résultats.


Figure 3. Résultats obtenus à l'aide de la méthode de germination des conidies pour Trichoderma asperellum après 15 heures à 25 °C dans un milieu gélosé à base de pomme de terre et de dextrose.

4. La nouvelle méthode PrecisionBio™ de Croda

Plus vous disposez de données, plus il est facile de décider quelle bouillie est la meilleure lorsqu'un produit biologique est inclus

Lors de l'évaluation de la viabilité des conidies dans les bouillies de traitement de semence, il est important de tenir compte non seulement de la capacité de germination, mais aussi de la vigueur des conidies (les aspects qui influent sur leur efficacité en tant que substance active). Cette méthode est complémentaire à la méthode de germination des conidies. Certains produits peuvent affecter spécifiquement cette vigueur et avoir un impact sur les performances du champignon lorsqu'il est appliqué. Pour évaluer cela, Incotec et sa société mère Croda ont développé PrecisionBio™. Il s'agit d'un nouveau logiciel qui traite les mêmes images de microscope optique que celles utilisées dans la méthode de germination des conidies mais évalue également la vigueur des conidies au fil du temps. Cela permet d'obtenir de nouvelles informations sur les effets de la bouillie sur les conidies de manière pratique. Grâce à ces informations supplémentaires sur le comportement des conidies, vous êtes mieux à même de prendre des décisions éclairées sur la bouillie à utiliser avec votre agent biologique actif, ce qui vous fait gagner du temps pendant les études.

Graphique : à titre d'exemple, l'aire sous la courbe de vigueur des conidies a été calculée à l'aide des données du logiciel PrecisionBio. Chaque colonne marquée d'une lettre différente est statistiquement différente selon le test de Dunnett avec α = 0,05.


Il est important de recueillir autant d'informations que possible sur la manière dont les composants de la bouillie affectent la survie des produits biologiques. Plus vous disposez de données, plus il est facile de décider quelle bouillie est la mieux adaptée à accueillir le produit biologique. Cela est crucial, car il n'existe pas de valeurs standard pour la concentration des produits biologiques dans le traitement de semence. Utilisez toujours toutes les informations disponibles sur le produit biologique que vous prévoyez d'utiliser. Incotec possède une grande expertise dans ce domaine et nous sommes heureux de vous aider. Pour plus d'informations, contactez-nous.