Cuatro formas de comprobar la eficacia de los productos biológicos en el tratamiento de semillas

Cuatro métodos de prueba para productos biológicos

1. Método de la zona de inhibición (prueba de Kirby-Bauer)

Es una forma rápida y sencilla de comprobar cómo afectan los diferentes componentes de la suspensión para el tratamiento de semillas a los microorganismos. Se utiliza ampliamente en los laboratorios debido a su simplicidad y es una prueba valiosa cuando se desea averiguar rápidamente qué componentes de la suspensión pueden utilizarse con productos biológicos. El inconveniente es que no confirma si el componente mata o solo detiene el crecimiento del microorganismo y solo muestra resultados visuales.


Fig. 1: ejemplo del resultado del método Kirby-Bauer que evalúa los efectos de diferentes componentes sobre Bacillus sp. en medio Muller-Hinton-Agar (MHA). A es la muestra de control (solo agua esterilizada), B muestra un efecto negativo leve y C muestra un efecto negativo grave.
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2. Método de unidades formadoras de colonias (UFC)

Este conocido método estima el número de células vivas (bacterias u hongos) en una muestra para determinar la concentración de microorganismos y su capacidad para producir colonias (o colonizar) en una condición ambiental específica. Es fácil de manejar, ofrece resultados en pocas horas y se utiliza ampliamente para comprobar la vida útil de los productos biológicos durante el proceso de registro. Sin embargo, dado que las colonias pueden provenir de una o más células agrupadas, los resultados son meras estimaciones. Las células viables que se aglomeran pueden contarse erróneamente como una sola colonia, lo que puede dar lugar a datos inexactos sobre el número de células viables (esta es una de las razones por las que los resultados se expresan en UFC/mL (o gramos) en lugar de células/mL (o gramos)).

Fig. 2: En esta imagen vemos la compatibilidad e incompatibilidad de diferentes colonias de Trichoderma asperellum después de tres días de incubación en medio de agar-patata-dextrosa a 25 °C.
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3. Método de germinación de conidios (método de viabilidad directa)

Este método es específico para esporas de hongos (conidios). En comparación con los métodos Kirby-Bauer y UFC, esta prueba proporciona información más precisa sobre el número de conidios viables en una muestra. También puede determinar si los conidios han germinado o no son viables, así como si están activados pero no han germinado (conidios viables pero no germinados debido, por ejemplo, a un período de incubación corto). Se puede recopilar información precisa sobre cómo los componentes afectan a la supervivencia de los hongos, por sí solos o en una formulación o suspensión para el tratamiento de semillas. Los resultados están disponibles en pocas horas y permiten evaluar los efectos a largo plazo de los diferentes componentes. En algunos casos, puede determinar si el componente matará o detendrá el crecimiento de los conidios con el tiempo.


Una de las desventajas de este método es el tiempo que lleva, principalmente durante las evaluaciones, que requieren el uso de un microscopio óptico con una cámara de alta definición incorporada. También requiere un control ambiental preciso durante el período de incubación, ya que cualquier desviación en la temperatura en esta etapa puede influir drásticamente en los resultados.


Figura 3. Resultados obtenidos mediante el método de germinación de conidios para Trichoderma asperellum después de 15 horas a 25 °C en agar patata-dextrosa.
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4. Nuevo método PrecisionBio™ de Croda

Cuantos más datos se tengan, más fácil será tomar decisiones sobre qué suspensión es la mejor cuando se incluye un producto biológico

Al evaluar la viabilidad de los conidios en las suspensiones para el tratamiento de semillas, es importante tener en cuenta no solo la capacidad de germinación, sino también el vigor de los conidios (los aspectos que afectan a su eficacia como principio activo). Este método es complementario al método de germinación de conidios. Algunos productos pueden afectar específicamente a este vigor y tener un impacto en el rendimiento del hongo cuando se aplica. Para evaluar esto, Incotec y su empresa matriz Croda han desarrollado PrecisionBio™. Se trata de un nuevo software que procesa las mismas imágenes de microscopio óptico utilizadas en el método de germinación de conidios y evalúa el vigor de los conidios a lo largo del tiempo. Esto genera nueva información sobre los efectos de la suspensión en los conidios de una manera conveniente. Con más información sobre el comportamiento de los conidios, usted estará en mejores condiciones de tomar decisiones seguras sobre qué suspensión utilizar con su agente biológico activo, lo que le ahorrará tiempo durante los estudios.


Gráfico: A modo de ejemplo, se calculó el área bajo la curva del vigor de los conidios utilizando los datos del software PrecisionBio. Cada columna etiquetada con una letra diferente es estadísticamente diferente según la prueba de Dunnett con α = 0,05.

Es importante recopilar toda la información posible sobre cómo los componentes de la suspensión afectan a la supervivencia de los productos biológicos. Cuantos más datos tenga, más fácil le resultará tomar decisiones sobre qué suspensión es la mejor cuando se incluye un producto biológico. Esto es fundamental, ya que no existen valores estándar para la concentración de productos biológicos en el tratamiento de semillas. Utilice siempre toda la información disponible sobre el producto biológico que piensa utilizar. Incotec tiene una gran experiencia en estos temas y estaremos encantados de ayudarle. Para obtener más información, póngase en contacto con nosotros.